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液相色譜柱的更換方式有哪些要點(diǎn)

2025-07-10 09:13:17

***、更換前的準(zhǔn)備

  1. 確認(rèn)新柱規(guī)格

  - 核對(duì)新色譜柱的型號(hào)、填料類(lèi)型(如C18、硅膠基質(zhì)等)、粒徑(如5 μm、3 μm)、孔徑、pH耐受范圍及流速上限,確保與原有系統(tǒng)兼容。

  - 檢查流動(dòng)相體系是否與新柱匹配(如反相柱需避免使用強(qiáng)堿性流動(dòng)相)。

  2. 工具與材料準(zhǔn)備

  - 專(zhuān)用扳手(用于擰緊柱接頭)、清潔紙巾、廢液容器、適合的流動(dòng)相(如甲醇、乙腈或超純水)。

  - 若使用UHPLC系統(tǒng),需確認(rèn)新柱的壓力耐受值(通?!?00 bar)。

  3. 系統(tǒng)狀態(tài)檢查

  - 記錄當(dāng)前系統(tǒng)的運(yùn)行參數(shù)(如流速、壓力、波長(zhǎng)等),以便更換后對(duì)比。

  - 提前配制足量的新流動(dòng)相,并脫氣處理。

  二、停機(jī)與舊柱拆卸

  1. 停機(jī)操作

  - 停止泵運(yùn)行,關(guān)閉檢測(cè)器(如UV燈)、自動(dòng)進(jìn)樣器等模塊電源,避免系統(tǒng)壓力突變導(dǎo)致液體噴濺。

  - 打開(kāi)排泄閥,釋放系統(tǒng)內(nèi)殘余壓力。

  2. 拆卸舊柱

  - 斷開(kāi)入口端接頭:用扳手逆時(shí)針擰動(dòng)入口管路螺母,小心取下管路,避免液體灑出。

  - 標(biāo)記方向:記錄舊柱標(biāo)簽上的流向箭頭(通常為“IN”和“OUT”),確保新柱安裝方向***致。

  - 取出舊柱:垂直向上拔出色譜柱,避免碰撞柱管導(dǎo)致物理?yè)p傷。

  - 清理接頭:用甲醇或異丙醇擦拭舊柱兩端的接頭,清除殘留顆?;蚓彌_鹽。

  三、新柱安裝與系統(tǒng)重啟

  1. 安裝新柱

  - 檢查密封墊:確認(rèn)柱兩端的密封墊(如PEEK或不銹鋼材質(zhì))無(wú)破損,必要時(shí)更換。

  - 對(duì)齊方向:嚴(yán)格按照“IN”端接泵、“OUT”端接檢測(cè)器的方向安裝,裝反會(huì)導(dǎo)致分離失效。

  - 擰緊接頭:用手將管路螺母旋至接觸柱體,再用扳手輕壓至密封(通常1/4~1/2圈),避免過(guò)度用力導(dǎo)致柱頭損壞。

  2. 系統(tǒng)沖洗與平衡

  - 初始流速:以較低流速(如0.2~0.5 mL/min)通入新流動(dòng)相,排出柱內(nèi)空氣。

  - 梯度平衡:若舊流動(dòng)相與新柱不兼容(如從含緩沖鹽切換至純有機(jī)相),需分段過(guò)渡(如先用甲醇沖洗,再切換至目標(biāo)流動(dòng)相)。

  - 基線(xiàn)穩(wěn)定:持續(xù)沖洗15~30分鐘,直至檢測(cè)器基線(xiàn)平穩(wěn)(UV噪聲<0.5 mAU),壓力值正常。

  四、性能驗(yàn)證與參數(shù)優(yōu)化

  1. 測(cè)試分離效果

  - 注入標(biāo)準(zhǔn)樣品(如萘、甲苯等非保留物質(zhì)或目標(biāo)分析物),檢查峰形是否對(duì)稱(chēng)、柱效(以塔板數(shù)衡量)是否達(dá)標(biāo)。

  - 對(duì)比新舊柱的保留時(shí)間、分離度及理論塔板數(shù),確認(rèn)新柱性能恢復(fù)。

  2. 調(diào)整運(yùn)行參數(shù)

  - 根據(jù)新柱特性微調(diào)流速(如粒徑更小的填料需降低流速)、柱溫或梯度程序。

  - 避免超過(guò)新柱的壓力上限(如常規(guī)C18柱壓力限制為40~60 bar)。

  五、注意事項(xiàng)與常見(jiàn)故障處理

  1. 關(guān)鍵操作禁忌

  - 禁止反向安裝:裝反會(huì)導(dǎo)致固定相流失、柱壓驟升甚至堵塞。

  - 避免干柱狀態(tài):柱內(nèi)無(wú)流動(dòng)相時(shí)切勿運(yùn)行泵,否則會(huì)損壞填料。

  - 慎用強(qiáng)酸/堿:超出柱子pH耐受范圍(如硅膠柱pH 2~8)會(huì)加速填料溶解。

  2. 典型問(wèn)題排查

  - 壓力異常:若新柱壓力遠(yuǎn)高于舊柱,檢查接頭是否漏液、填料是否堵塞或流速設(shè)置過(guò)大。

  - 峰形拖尾:可能因流動(dòng)相未充分平衡、樣品過(guò)載或舊柱污染殘留。

  - 氣泡問(wèn)題:系統(tǒng)重啟后需排氣,可通過(guò)快速?zèng)_洗或超聲波處理消除。


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